上海千实讲述超声波细胞破碎仪的相关注意问题

上海千实精密机电科技有限公司成立于2012年，是由一群经验丰富的工程师以及逐渐崭露头角的设计专家组合而成的团队，千实机电专注于研发、设计及生产纺织类等物理性能测试仪器。公司总部位于上海，为各国公司、学术研究单位及检测机构提供纺织测试仪器和服务，上海千实是目前国内较有竞争力和研发实力的纺织测试仪器厂家之一，本着全心全意为客户服务，努力推动我国纺织检测仪器技术革新而努力。

上海千实精密机电科技有限公司品牌是Qinsun，主要开发和生产许多基础型纺织测试仪器，包括水洗色牢度测试仪、织物耐磨仪、起毛起球性测试仪、摩擦色牢度测试仪、耐熨烫牢度测试仪和汗渍色牢度测试仪等，这些产品在纺织测试领域中被广泛使用。为了满足使用者的实验需要，我们也推陈出新，提供您创新实用的测试仪器。Qinsun产品包含了汽车饰件测试仪、环境气候老化测试仪、纤维测试仪、纱线测试仪、织物面料测试仪、地毯测试仪、土工布测试仪及其它行业相关的测试设备。

细菌工程菌胞内表达主要分为两种形式，一种是在强启动子条件下的高效表达，由于蛋白的过度表达;

使蛋白不能及时有效折叠而发生无规则卷曲，以固体颗粒的形式堆积于胞间质中，这就是所说的包涵体;

另外一种是间质内的可溶性表达，即可以发生正常折叠，具有生物活性。

一般情况下，细菌只要被正常破壁就可以通过离心的形式将包涵体和可溶性表达的蛋白分离开。

超声破碎的条件一般是300w，10s/10s，20分钟，具体条件可根据自身情况而定。

超声前菌体的准备：菌液离心后，先用PBS将菌沉淀洗2-3遍;

然后按原菌液体积的1/5-1/10加入裂解液重悬菌体，裂解液的成分：

50mMTris-HCl,pH8.0,2mMEDTA，100mMNaCl，加溶菌酶至100ug/ml，0.1%TritonX-100。切记冰浴超声！

如何判断是否超声完全，根据经验，一般有以下几个方面：

1，外观判断：超声前菌悬液是浑浊的，超声完全后变的透明、清澈。

2，液体的粘性：超声后菌液从枪头滴下不粘连。

3，高速离心：有用高速离心检测超声破碎程度的（一般用6,000g10min,比一般离心收集菌体的转速高一点）。沉淀是未破碎或破碎不完全的菌体。

4，染色：破碎后的菌液涂片，革兰氏结晶紫溶液染色0.5分钟，镜检。

（超声后加入核酸酶消除核酸对蛋白的污染）

一些需要注意的问题：

1，蛋白以包涵体形式表达，追求的是高破碎率，要求细胞碎片很小;

而另一种蛋白是可溶形式表达，所以细胞碎片不能很小，两种情况要求不同但目的相同，都是便于后期的固液分离。

2，如果超声时出现黑色沉淀，说明超声功率太强。

3，超声时间太长、功率太高对蛋白活性肯定有影响。

4，尽量防止泡沫的产生。